DSG型生物信息紅外肝病治療儀促進(jìn)小鼠肝臟微循環(huán)的實(shí)驗(yàn)研究
發(fā)布時(shí)間：2011-02-25 瀏覽次數(shù)：11317
田甜 徐列明
【摘要】目的 研究DSG型生物信息紅外肝病治療儀（BILT肝病治療儀）對(duì)小鼠肝臟微循環(huán)的影響。方法 將40只SPF小鼠造模后隨機(jī)均分為未照射模型組、冷光源照射模型組、紅外線(xiàn)照射模型組和BILT肝病治療儀照射模型組，另取20只正常小鼠作為對(duì)照。每組分別以激光多普勒血流儀測(cè)定肝臟血流量并以顯微活體視頻技術(shù)觀(guān)察肝臟微循環(huán)血流速度，同時(shí)進(jìn)行肝臟病理學(xué)檢查和血流清生化學(xué)檢查。結(jié)果 BILT肝病治療儀照射模型組肝臟平均血流灌注量與未照射模型組比較明顯增加（P=0.004），而冷光源、紅外線(xiàn)照射模型組與未照射模型組比均無(wú)明顯增加血流量作用（P=0.713和0.465）；未照射正常組較未照射模型組小鼠肝臟微血管內(nèi)紅細(xì)胞平均流速快,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)；BILT肝病治療儀照射模型組肝臟微循環(huán)平均流速較未照射模型組、冷光源照射模型組和紅外線(xiàn)照射模型組的流速也有所增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004、0.020和0.030)。BILT肝病治療儀照射模型組AST活性較未照射模型組明顯降低（P=0.027），該組羥脯氨酸（Hyp）平均含量低于未照射模型組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.433)。結(jié)論 BILT肝病治療儀可改善肝纖維化小鼠肝臟的微循環(huán)并降低肝纖維化小鼠血清AST活性，改善肝臟病理狀態(tài)。
【關(guān)鍵詞】 纖維化；肝臟微循環(huán)；紅外線(xiàn)；活體顯微視頻技術(shù)
DSG biological information infrared liver disease therapy instrument improves liver microcirculation in mice TIAN Tian ,XU Lie-ming. Institute of Liver Disease, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203,China
Corresponding author: XU Lie-ming, Email: [email protected]
【Abstact】 Objective To investigate the effect of DSG biologic information infrared liver disease therapy instrument（BILT liver disease therapy instrument） on liver microcirculations in mice. Methods Liver fibrosis was induced in 40 SPF mice which were randomized into 4 groups:without irradiation group, cold light irradiation group,infrared light irradiation group and BILT group（10 in each group）.Twenty
healthy mice were taken as the control. Liver blood flow of each group was observed by laser-Doppler flow instrument, and blood flow rate of liver microcirculation in each group was observed by intravital microscopy. Pathological examination and serum biochemistry were also performed. Results In fibrosis mice , the liver blood flow in average of BILT group was higher than that of without irradiation group (P =0.004),while comparing with without irradiation group there were no significant differences in liver blood flows of the cold light irradiation group and infrared light irradiation group(P =0.713 and 0.465). Red blood cell velocity of microvessels in average of the healthy group (without irradiation) was higher than that in the without irradiation group of fibrosis mice (P =0.001),and it in the BILT
DOI：10.3760/cma.j.issn.1674-2397.2009.01.007
基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）部分資助項(xiàng)目（2006CB504800）；上海市重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)資助項(xiàng)目（Y0302）；上海市教育委員會(huì)E-研究院建設(shè)計(jì)劃項(xiàng)目部分資助項(xiàng)目（E03008）
作者單位：201203 上海中醫(yī)藥大學(xué)肝病研究所（田甜、徐列明）；上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院肝硬化科
上海中醫(yī)藥大學(xué)肝腎疾病病證教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海市高校中醫(yī)內(nèi)科學(xué)E-研究所（徐列明）
通訊作者：.徐列明，Email:[email protected]
group（fibrosis mice）was also higher than those in other groups of fibrosis mice（P =0.004,0.020 and 0.030）.For fibrosis mice, the averageAST in BILT group was lower than that in the without irradiation group(P =0.027),and the difference in hydroxyproline（Hyp）levels between the groups was not of statistical significance（P =0.433）.
Conclusion BILT liver disease therapy instrument can improve the liver microcir-culation, reduce AST
level and improve liver pathological state in mouse with fibrosis.
【Key words】 Fibrosis; Liver microcirculation;Infrared rays; Intravital microscopy
應(yīng)用激光多普勒技術(shù)和顯微活體視頻技術(shù)，觀(guān)察以活血化瘀原理研制的DSG型生物信息紅外肝病治療儀（BILT肝病治療儀）對(duì)正常小鼠和肝纖維化模型小鼠肝臟微循環(huán)的影響，從“活血”改善微循環(huán)角度詮釋BILT肝病治療儀的作用。
1材料和方法
1.1 材料 昆明種雄性小鼠60只，體質(zhì)量(30±5)g，SPF級(jí)，由上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；四氧化碳(CCl4)和橄欖油（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；異硫氰酸熒光素（Fluorescein isothiocyanate isomer I，F(xiàn)ITC，美國(guó)sigma公司）。PowerLab/4sp 激光多普勒血流儀和Chart 5.0 (Powerlab/4sp)記錄和分析軟件（澳大利亞ADI公司）；醫(yī)用冷光源（浙江醫(yī)學(xué)儀器廠(chǎng)）；紅外燈（江蘇海門(mén)醫(yī)療器械公司）； BILT肝病儀（杭州大力神醫(yī)療器械有限公司）；MT-2熒光倒置顯微鏡、CCD顯微攝像和錄像系統(tǒng)（Olympus 公司）。
1.2. 方法
1.2.1 造模 參照余萬(wàn)桂[1]的方法建立小鼠肝纖維化模型：40只小鼠用20％CCl4以5mg/kg頸部皮下注射，每5天注射1次，共6周。
1.2.2 分組與準(zhǔn)備 小鼠被隨機(jī)分為正常組（20只）和造模組（40只）。正常組小鼠再隨機(jī)分為未照射正常組和BILT肝病治療儀照射正常組，每組10只。造模組小鼠造模后隨機(jī)分為未照射模型組、冷光源照射模型組、紅外線(xiàn)照射模型組和BILT肝病治療儀照射模型組，每組10只。接受照射的小鼠分別裝入自制小鐵籠內(nèi)，露出腹部肝臟投影區(qū)，距相應(yīng)光源15cm，每天照射1次，每次15min。照射療程為4周。療程結(jié)束后，各組隨機(jī)分出5只進(jìn)行激光多普勒血流量測(cè)定，余下5只以顯微活體視頻技術(shù)觀(guān)察肝臟微血管和肝竇內(nèi)血流速度。
1.2.3 激光多普勒血流儀測(cè)定肝臟微循環(huán)平均血流灌注量用Chart 5.0 (Powerlab/4sp)記錄和分析軟件記錄小鼠肝臟平均血流灌注量，每只小鼠記錄10min。取5min后平穩(wěn)段數(shù)據(jù)計(jì)算其平均值，得到各組小鼠平均血流灌注量。
1.2.4 活體顯微視頻技術(shù)觀(guān)測(cè)肝臟微循環(huán)流速
1.2.4.1 熒光標(biāo)記的紅細(xì)胞制備 參照參考文獻(xiàn)[2] 中的方法。
1.2.4.2 活體動(dòng)物測(cè)前準(zhǔn)備 小鼠以2%戊巴比妥鈉按2ml/kg劑量麻醉后，沿正中線(xiàn)剪開(kāi)小鼠腹壁，拉出小鼠肝臟平鋪于載玻槽玻片上，置Olympus倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察。
1.2.4.3 注射FITC標(biāo)記紅細(xì)胞并顯微攝像設(shè)置拍攝像素為最小值，曝光時(shí)間為60ms，使拍攝速度達(dá)到最快。從下腔靜脈注射FITC標(biāo)記的紅細(xì)胞0.05ml，在顯微鏡下找到合適的觀(guān)察部位，然后切換到電腦上仔細(xì)觀(guān)察微血管和肝竇內(nèi)血流狀況并數(shù)碼錄像，用視頻處理軟件比較各組間微循環(huán)血流速度的差異。
1.2.4.4 圖象處理 用Image-pro plus 6.0軟件處理視頻圖像，尋找直徑在20mm以下微血管內(nèi)合適的熒光標(biāo)記的紅細(xì)胞進(jìn)行追蹤。每個(gè)視頻至少找出3個(gè)FITC標(biāo)記紅細(xì)胞的軌跡取平均值，保存和記錄各軌跡數(shù)據(jù)及圖象，本系統(tǒng)按最快10楨/s計(jì)算，通過(guò)追蹤FITC標(biāo)記紅細(xì)胞的兩楨圖象之間流動(dòng)的距離和時(shí)間計(jì)算其在微血管內(nèi)的流動(dòng)速率。
1.2.5 樣本的采集與處理 用激光多普勒血流儀測(cè)定每組小鼠肝臟平均血流灌注量后，摘眼球采血，4℃下靜置2h，離心半徑9.4cm,3000r/min離心15min，取上清液分裝于1.5ml離心管內(nèi)，-70℃低溫保存；動(dòng)物采血處死后，取下肝臟切取約1.0cm´0.8cm´0.3cm大小肝組織，10%中性甲醛固定，24h后逐級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，56℃石蠟包埋，4µm厚切片，用于HE和膠原染色。
1.2.6 肝臟組織學(xué)觀(guān)察 按照本研究所制定的膠原纖維增生程度的半定量標(biāo)準(zhǔn)[3]，鏡下觀(guān)察各組肝組織膠原染色片，判斷肝纖維化的程度。各肝組織樣本進(jìn)行膠原纖維染色后，用圖象定量分析系統(tǒng)掃描，讀取膠原染色陽(yáng)性面積百分比，取每張切片5個(gè)視野的平均值，進(jìn)行膠原纖維增生程度的半定量統(tǒng)計(jì)分析。
1.2.7 血清生化學(xué)檢測(cè) ALT和AST活性的檢測(cè)采用賴(lài)氏法；Alb含量的測(cè)定采用溴甲酚綠法；TBil含量的測(cè)定采用苯甲酸鈉—咖啡因比色法，上述檢測(cè)均由曙光醫(yī)院檢驗(yàn)科完成。
1.2.8 肝組織羥脯氨酸（Hyp）測(cè)定 采用Jamall法[4]測(cè)定。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。定量資料的數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析(ANOVA)，結(jié)果以`X±S表示，定性等級(jí)資料的數(shù)據(jù)分析采用Ridit分析，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)水準(zhǔn)a =0.05。
2 結(jié)果
2.1 BILT肝病治療儀對(duì)肝纖維化小鼠肝臟微循環(huán)的影響
2.1.1 激光多普勒血流測(cè)定肝臟微循環(huán)平均血流灌注量 未照射模型組肝臟平均血流灌注量較未照射正常組略低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.679） BILT肝病治療儀照射正常組的指標(biāo)略高于未照射正常組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.142）；BILT肝病治療儀照射模型組肝臟血流量與未照射模型相比明顯增加（P=0.004），而其它光源作用于造模組后與未照射模型相比均無(wú)明顯增加血流量作用(P=0.713和0.465)（表1）。
表1. 不同光源處理后各組小鼠肝臟平均血流灌注量（`X±S）
注： 與未照射模型組比，aP=0.0
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2.1.2 活體顯微視頻技術(shù)觀(guān)測(cè)肝臟微循環(huán)流速
1.2.2.1 鏡下觀(guān)察 正常小鼠肝臟表面血管豐富，肝竇以肝小葉中央靜脈為中心呈密集的樹(shù)枝狀分布于其周?chē)?，?個(gè)肝小葉間，毛細(xì)血管相互吻合，血管邊界清晰，血流向中央靜脈流動(dòng)（圖1a）。各模型組與正常組小鼠肝臟微循環(huán)流速比較均明顯減慢；BILT肝病儀照射模型組小鼠肝臟微循環(huán)流速雖也較正常組明顯減慢，但比未照射模型組微循環(huán)流速快。各模型組小鼠均可見(jiàn)肝臟微血管數(shù)明顯減少，肝小葉間微血管數(shù)稀疏，血管周?chē)行∨轄钔噶劣?，血管?nèi)可見(jiàn)少量標(biāo)記的紅細(xì)胞聚集和黏附（圖1b）。
2.1.2.2 圖象處理后的數(shù)據(jù)分析 正常組及造模組視頻處理后圖像見(jiàn)圖2，各組小鼠肝臟內(nèi)微血管內(nèi)紅細(xì)胞流速比較見(jiàn)表2。未照射正常組與未照射模型組小鼠肝臟內(nèi)微循環(huán)流速比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）；冷光源照射模型組、紅外線(xiàn)照射模型組與未照射模型組小鼠肝臟微血管紅細(xì)胞流速比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.909和0.925），BILT肝病治療儀照射模型組微血管內(nèi)紅細(xì)胞流速較未照射模型組、冷光源照射模型組、紅外線(xiàn)照射模型組增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004、0.020和0.030）。
注:(1a)正常小鼠肝臟微血管，（1b）模型小鼠肝臟微血管，箭頭所示為熒光標(biāo)記的紅細(xì)胞；
(2a)正常小鼠，(2b)模型小鼠，圖中直線(xiàn)所示為紅細(xì)胞流動(dòng)軌跡。
圖1 正常小鼠和模型小鼠肝臟微血管Х200 圖2 正常組和模型組小鼠肝臟微循環(huán)視頻處理后的圖像及軌跡
Fig1 Hepatic microvasculars of healthy mice and fibrosis mice Х200
Fig2 Video images and tracks of hepatic microciculation in healthy and fibrosis mice
表2. 不同光源照射后小鼠肝臟微血管內(nèi)紅細(xì)胞流速（`X±S ）
Table2 Red blood cell velocity of hepatic microvessels of mice treated by different light sources（`X±S ）
.2 各組小鼠肝臟病理學(xué)觀(guān)察
2.2.1 大體觀(guān)察 造模結(jié)束時(shí)模型小鼠較正常組小鼠明顯萎靡、毛發(fā)雜亂。正常組和BILT肝病治療儀照射正常組小鼠肝臟表面光滑、質(zhì)軟、色紅褐；未照射模型組及接受不同光源照射的模型組小鼠肝臟均可見(jiàn)不同程度的腫脹，肝表面呈顆粒狀，質(zhì)較硬，色暗。
2.2.2 肝組織HE染色觀(guān)察 未照射正常組和BILT肝病治療儀照射正常組小鼠的肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞在中央靜脈周?chē)史派錉钆帕?，無(wú)明顯變性壞死或炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；各模型組小鼠肝細(xì)胞均有不同程度的細(xì)胞質(zhì)疏松；未照射模型組鏡下可見(jiàn)中央靜脈聚集，出現(xiàn)“輻輳現(xiàn)象”；冷光源照射模型組有少量散在肝細(xì)胞核空泡變性，肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)疏松明顯；紅外照射模型組大量肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)疏松；BILT肝病治療儀照射模型組僅有少量肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)疏松（圖3）。
2.2.3 肝組織膠原纖維增生的半定量分析 正常組小鼠肝組織無(wú)纖維組織增生；各模型組小鼠肝組織匯管區(qū)擴(kuò)大結(jié)締組織增生，向小葉內(nèi)伸展，形成不完全間隔及個(gè)別菲薄的完全間隔（圖4）。肝組織膠原纖維增生的半定量分析顯示：未照射模型組與未照
射正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.06），BILT肝病儀照射模型組5例評(píng)級(jí)均為Ⅱ
注：（a）未照射正常組；（b）BILT肝病治療儀照射正常組；（c）未照射模型組；（d）冷光源照射模型組；（e）紅外線(xiàn)照射模型組；（f）BILT肝病治療儀照射模型組
圖3. 不同光源照射后小鼠肝組織炎性反應(yīng)變化HEХ200
Fig3 Inflammation in liver tissues of mice treated by different light sources HE ×200
圖4不同光源照射后各組小鼠肝組織膠原纖維沉積變化 天狼猩紅染色´100
Fig4 Collagenous fibre deposit in liver tissues of mice treated by different light sources
Sirius red stain´100
級(jí)，但與未照射模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，接受不同光源照射模型組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3）。
表3 不同光源照射小鼠的膠原纖維增生情況（Ridit分析）
注：與未照射正常組比較，aP=0.006
2.2.4 膠原纖維增生程度圖像處理分析 未照射模型組小鼠膠原纖維染色的陽(yáng)性面積比與未照射正常組比較明顯增大(P=0.007)；BILT肝病治療儀照射模型組小鼠膠原纖維染色的陽(yáng)性面積比與未照射模型組明顯減小（P=0.001）；冷光源照射模型組、紅外線(xiàn)照射模型組的小鼠膠原纖維染色的陽(yáng)性面積比則與未照射模型組無(wú)明顯差別（P=0.480和0.133）（表4）。
表4 組小鼠肝組織纖維增生的半定量分析（`X±S ）
注：與未照射正常組比,a P=0.007；與未照射模型組比較, bP=0.001
2.3 血清生化檢測(cè)結(jié)果
2.3..1 各組小鼠血清ALT、AST、TBiL及Alb值
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.2 各組小鼠肝臟病理學(xué)觀(guān)察 2.2.1 大體觀(guān)察 造模結(jié)束時(shí)模型小鼠較正常組小鼠明顯萎靡、毛發(fā)雜亂。正常組和BILT肝病治療儀照射正常組小鼠肝臟表面光滑、質(zhì)軟、色紅褐；未照射模型組及接受不同光源照射的模型組小鼠肝臟均可見(jiàn)不同程度的腫脹，肝表面呈顆粒狀，質(zhì)較硬，色暗。 2.2.2 肝組織HE染色觀(guān)察 未照射正常組和BILT肝病治療儀照射正常組小鼠的肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞在中央靜脈周?chē)史派錉钆帕?，無(wú)明顯變性壞死或炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；各模型組小鼠肝細(xì)胞均有不同程度的細(xì)胞質(zhì)疏松；未照射模型組鏡下可見(jiàn)中央靜脈聚集，出現(xiàn)“輻輳現(xiàn)象”；冷光源照射模型組有少量散在肝細(xì)胞核空泡變性，肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)疏松明顯；紅外照射模型組大量肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)疏松；BILT肝病治療儀照射模型組僅有少量肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)疏松（圖3）。 2.2.3 肝組織膠原纖維增生的半定量分析 正常組小鼠肝組織無(wú)纖維組織增生；各模型組小鼠肝組織匯管區(qū)擴(kuò)大結(jié)締組織增生，向小葉內(nèi)伸展，形成不完全間隔及個(gè)別菲薄的完全間隔（圖4）。肝組織膠原纖維增生的半定量分析顯示：未照射模型組與未照 射正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.06），BILT肝病儀照射模型組5例評(píng)級(jí)均為Ⅱ
注：（a）未照射正常組；（b）BILT肝病治療儀照射正常組；（c）未照射模型組；（d）冷光源照射模型組；（e）紅外線(xiàn)照射模型組；（f）BILT肝病治療儀照射模型組 圖3. 不同光源照射后小鼠肝組織炎性反應(yīng)變化HEХ200 Fig3 Inflammation in liver tissues of mice treated by different light sources HE ×200
圖4不同光源照射后各組小鼠肝組織膠原纖維沉積變化 天狼猩紅染色´100 Fig4 Collagenous fibre deposit in liver tissues of mice treated by different light sources Sirius red stain´100 級(jí)，但與未照射模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，接受不同光源照射模型組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3）。
表3 不同光源照射小鼠的膠原纖維增生情況（Ridit分析）
注：與未照射正常組比較，aP=0.006 2.2.4 膠原纖維增生程度圖像處理分析 未照射模型組小鼠膠原纖維染色的陽(yáng)性面積比與未照射正常組比較明顯增大(P=0.007)；BILT肝病治療儀照射模型組小鼠膠原纖維染色的陽(yáng)性面積比與未照射模型組明顯減?。?I>P=0.001）；冷光源照射模型組、紅外線(xiàn)照射模型組的小鼠膠原纖維染色的陽(yáng)性面積比則與未照射模型組無(wú)明顯差別（P=0.480和0.133）（表4）。
表4 組小鼠肝組織纖維增生的半定量分析（`X±S ）
注：與未照射正常組比,a P=0.007；與未照射模型組比較, bP=0.001
2.3 血清生化檢測(cè)結(jié)果 2.3..1 各組小鼠血清ALT、AST、TBiL及Alb值 未照射正常組與模型組比較ALT、AST活性及TBil、Alb含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；BILT肝病治療儀照射模型組的AST活性較未照射模型組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.027）；冷光源照射模型組和紅外線(xiàn)照射模型組AST活性均與未照射模型組無(wú)明顯差別；各模型組間ALT活性及TBil、Alb含量無(wú)明顯差異。（表5） 2.3.2 各組小鼠肝組織Hyp含量 未照射模型組的Hyp平均含量比未照射正常組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.007），說(shuō)明造模是成功的。BILT肝病治療儀照射模型 表5 各組肝肝纖維化小鼠血清ALT、AST活性及Tbil、Alb含量的影響（`X±S ）
注：與未照射模型組比，aP=0.027 組的Hyp平均含量比未照射模型組肝組織稍低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，冷光源照射模型組、紅外照射模型組和BILT肝病儀照射模型組之間Hyp含量的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表6）。 表6 不同光源對(duì)肝纖維化小鼠肝組織Hyp含量的影響（`X±S ）
注：與未照射模型組比，aP=0.007 3 討論 肝纖維化是各種慢性肝炎病理變化的重要特征之一,是各種慢性肝炎向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)病理生理階段。饒嫻宜等[5]于20世紀(jì)80年代提出“肝微循環(huán)障礙是病毒性肝炎發(fā)病的病理生理基礎(chǔ)”，認(rèn)為在各型肝炎的整個(gè)過(guò)程中均存在著不同程度的肝臟微循環(huán)障礙，改善微循環(huán)是治療病毒性肝炎的重要環(huán)節(jié)。鑒于肝纖維化過(guò)程中肌成纖維細(xì)胞收縮與微循環(huán)障礙的形成和發(fā)展有著密切聯(lián)系，因此通過(guò)改善肝臟微循環(huán)是抗肝纖維化治療的重要措施，對(duì)于逆轉(zhuǎn)肝纖維化具有重要的臨床意義。 國(guó)內(nèi)學(xué)者經(jīng)過(guò)多年研究，把中醫(yī)的“瘀血”與肝纖維化聯(lián)系在一起，認(rèn)為肝纖維化是“瘀”，因此“活血化瘀”可以達(dá)到抗肝纖維化的目的[6]。如果把活血化瘀作用限定在促進(jìn)血液循環(huán)方面，那么熱能和機(jī)械能等物理作用也有類(lèi)似的活血化瘀作用。BILT肝病治療儀的治病原理符合中醫(yī)的活血化瘀機(jī)制，用紅外線(xiàn)透射組織，使肝區(qū)部位獲得紅外波能量，改善肝細(xì)胞膜的通透性，使肝血竇的血流量增加。 為觀(guān)察BILT肝病治療儀對(duì)肝纖維化的治療作用，本文用CCl4誘導(dǎo)小鼠復(fù)制肝纖維化動(dòng)物模型。與未照射正常組比較，未照射模型小鼠的AST活性和TBil含量有所升高但差異不顯著，同時(shí)應(yīng)用多普勒技術(shù)看不到未照射模型組小鼠的肝臟平均灌注量有明顯變化。這些陰性結(jié)果的產(chǎn)生可能與選擇的小鼠品系有關(guān)。 本實(shí)驗(yàn)顯示，肝纖維化模型小鼠接受BILT肝病治療儀照射后，肝臟病理改變較輕，僅有少量肝細(xì)胞變性，膠原顯微半定量分析顯示肝纖維化程度5例全為II級(jí)，為造模各組中最輕者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與樣本量少有關(guān)。膠原纖維增生半定量分析顯示，BILT肝病治療儀照射模型組小鼠膠原纖維染色的陽(yáng)性面積比較未照射模型組明顯減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該組肝Hyp含量在造模各組中也是最低，雖與其他組別Hyp含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但提示具有改善肝纖維化的趨勢(shì)。BILT肝病治療儀可明顯降低肝纖維化模型小鼠血清AST活性，與未照射模型組比較有明顯差異。肝纖維化小鼠經(jīng)BILT肝病治療儀照射后，肝臟微循環(huán)流量和流速明顯增加，較未照射模型組差異顯著，但未發(fā)現(xiàn)其對(duì)正常組產(chǎn)生影響。冷光源和紅外線(xiàn)照射肝纖維化小鼠，無(wú)論是肝臟病理、肝臟各生化指標(biāo)，還是肝臟微循環(huán)，其產(chǎn)生的影響和未照射模型組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 近年來(lái)，非藥物療法在國(guó)內(nèi)外受到廣泛關(guān)注，其優(yōu)點(diǎn)在于用物理學(xué)原理治療肝臟疾病，避免了藥物在代謝過(guò)程中對(duì)肝、腎潛在的不良反應(yīng)。BILT肝病治療儀作為輔助治療手段，操作簡(jiǎn)單，使用方便，可避免因使用過(guò)多藥物而增加對(duì)肝臟的負(fù)擔(dān)。該儀器安全性好，與患者治療部位無(wú)直接接觸，避免了交叉感染的可能性，將是一種有前途的非藥物治療肝病方法，值得臨床推廣。 志謝 本文采用的活體顯微視頻技術(shù)得到深圳南山醫(yī)院齊柯主任的幫助，特表謝意。 參 考 文 獻(xiàn) [1]Yu WG, Zhang HW, He SR. Effects of panax notoginseng saponins on TGF-ß1 and IL-1 in mice serum with liver fibrosis. Shizhen Guoyi Guoyao,2006,17(1):54-55(in chinese) 余萬(wàn)桂，張恒文，賀尚榮，三七總皂苷對(duì)肝纖維化小鼠血清中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-ß1及白介素-1的影響。時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006,17(1):54-55 [2] Zheng XX, Chen HF.Microcirculation blood flow quantitative measurement system[D].Zhejiang University,2002(in chinese) 鄭筱祥，陳鴻峰，微循環(huán)流速的定量測(cè)試系統(tǒng)[D]。 浙江大學(xué)，2002 [3] Xu LM,Liu P,Liu C ,et al. Effect of extract from semen persical on experimental hepatic fibrosis. Zhongguo Zhongyao Zazhi,1994,19(8):491-494.(in chinese) 徐列明，劉平，劉成，等。桃仁提取物抗實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的作用觀(guān)察。中國(guó)中藥雜志，1994,19(8):491-494. [4] Jamall IS ,Finelli VN, Que Hee SS. A simple method to determine nanogram levels of 4-hydroxyproline in biological tissues Anal Biochem 1981,112(1):70-75 [5] Rao XY, Su L,Wang XX,et al.Hepatic microcirculatory disturbance contributes to the pathophysiological basis of viral hepatitis. Yixue Wenxuan,1984,3(1):17-27(in chinese) 饒嫻宜，蘇漣，王秀霞，等。肝微循環(huán)障礙是病毒性肝炎發(fā)病原理的病理生理基礎(chǔ)。醫(yī)學(xué)入選， 1984,3(1):17-27 [6] Zhou Y,Gu J,Xu LM.Effects of Salvianolic acid B on elevated portal pressure and hepatic endothelin-1 level in rat model of hepatocirrhosis. Zhongguo Zhongxiyi Jiehe Xiaohua Zazhi,2007,15(1):4-7.(in chinese) 周楊，顧杰，徐列明。丹參酚酸B鹽對(duì)肝硬化大鼠門(mén)靜脈高壓及肝組織中內(nèi)皮素-1的影響。中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志。2007,15(1):4-7. （收稿日期：2008-10-08） （本文編輯：黃建榮）
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